目錄
采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種背景
進行蘑菇（這里通常指雙孢蘑菇的白色種、奶色種以及棕色種，拉丁學名Agaricus bisporusLanger）的人工栽培時，首先要制作好栽培種，才能保證將來栽培有好的收獲。中國是雙孢蘑菇生產大國，僅福建省雙孢蘑菇年產量就占世界的10％，全國原種需要量為200～260萬瓶，栽培種為1.0～1.5億瓶，產值在2～3億元。福建省的雙孢蘑菇選育種技術已達水平，育成雜交新菌株AS2796（閩4號）及其選育方法已獲公開（CN1125034），在全國廣泛使用。2009年4月前蘑菇菌種制作工藝和設備卻大都停留在手工作坊狀態，生產工藝較落后，生產效率偏低，不少工序仍依賴手工（菌種菌齡上下不一，生長緩慢），遠不能滿足栽培種的生產需求，而傳統的菌種采用玻璃瓶，其缺陷顯著：易碎、自身重量大、運輸不便、使用也不方便等制約其發展前景。中國國內在使用塑料袋方面，仍未擺脫瓶頸的約束，而且沒有解決好塑料強度與呼吸性兩大難題，雖然降低了單位包裝成本，但成品率卻下降，同樣無法大規模應用。以上這些因素使選育出的優質菌株無法更好的推廣，而各地分散生產的栽培種質量無保證，每年都有大量不合格菌種投入生產，減產幅度為10～15％，而且造成中國成為蘑菇出口大國的同時，而蘑菇菌種的出口幾乎為零。
此外，常規的高壓滅菌鍋不能實現在培養基高壓滅菌后保證無菌條件下快速冷卻，從而不能保證菌種制作的質量。[3]
采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種發明內容
采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種目的
《采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種》的目的是提供一種采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種技術，包括制作方法，制作過程中用到的設備和該設備的使用方法，采用呼吸塑料袋并結合該發明特殊的制作步驟和設備，可大量迅速生產蘑菇大包裝栽培種，同時可降低制造成本，使操作達到自動化并節省人力的可靠的蘑菇菌種制作方法；在制作過程中實現高壓滅菌、無菌冷卻一體化，保證了菌種制作的質量，又節約了時間成本，操作簡便，易于機械化生產，節省勞動力；成品率高；具有顯著的經濟效率。[3]
采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種技術方案
《采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種》的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法：采用呼吸塑料袋作為正式培養的容器，經過母種的活化培養步驟、制備原種的預培養步驟以及將原種接種于大袋栽培種的正式培養步驟制作出大袋蘑菇栽培種。
所述制作步驟為：
（1）母種的活化培養步驟：由保存菌株進行活化培養獲得母種；
（2）制備原種的預培養步驟：將母種進行預培養獲得原種；
（3）正式培養步驟：將呼吸塑料袋裝車推入高壓滅菌鍋中，對小麥培養基進行高壓滅菌，高壓滅菌后，小麥培養基冷卻至常溫，然后將步驟（2）預培養獲得的原種接種于所述呼吸塑料袋中小麥培養基進行正式培養，培養過程培養室溫度保持20～25℃；培養13～16天待呼吸塑料袋長滿菌絲，正式培養完畢將裝有菌種的呼吸塑料袋移入3±1℃冷庫保藏，大袋蘑菇栽培種制作完成。[3]
采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種改善效果
（1）使用呼吸塑料袋生產大袋蘑菇栽培種，并在接種過程中將原種和小麥培養基充分混合均勻，縮短了每個菌絲體之間的生長距離，并縮短了培養完成的時間，只需要13～16天時間，一般只有傳統瓶裝菌種培養時間的三分之一到一半。蘑菇栽培種的生產多在夏秋溫度較高的期間進行，需要空調進行制冷調節，縮短培養時間意味著可以節約大量能源。
（2）使用呼吸塑料袋生產大袋蘑菇栽培種，由于原種和小麥培養基混合均勻，袋內各處菌絲體的菌齡基本一致，都不超過16天，而傳統瓶裝菌種上下菌齡相差30～35天，造成菌種剛走到底，瓶口附近菌絲體已經接近老化。
（3）由于大袋蘑菇栽培種的制作要比傳統瓶裝栽培種要求更高的潔凈度環境下，按該發明要求進行制作，大袋蘑菇栽培種比傳統瓶裝栽培種染菌率較低，提高成品率4～6％。
（4）由于大袋蘑菇栽培種菌齡短，質地疏松，又是塑料袋包裝，使用方便，開袋即用，使菌絲體受到最小的損傷，而傳統的瓶裝菌種菌齡長，質地較硬，又是開口相對較小的瓶口，使用過程需要用器械摳扒，不僅費力費時，不利于蘑菇規模化栽培，而且菌絲體受到較大損傷，在播種到栽培料理需要更長的恢復時間，一定程度上影響產量。
（5）由于大袋蘑菇栽培種使用呼吸塑料包裝，無論在生產、儲存和運輸過程，破損度很低，不足0.5％，而傳統的瓶裝栽培種使用易碎的玻璃瓶，每個過程度都存在破碎的隱患，玻璃瓶年損耗率在5～10％，也嚴重制約中國蘑菇栽培種的出口。
（6）由于大袋蘑菇栽培種的包裝材料——塑料為一次性容器使用（當然可作為塑料米原料重新回收利用），菌種采購后僅需支付運費作為菌種款的額外費用，而傳統的瓶裝栽培種的玻璃須反復使用，體積大，使用過程不僅要支付運費（由于重量幾乎是呼吸塑料袋菌種的2倍，需要多支付1倍的運費），還要支付摳種、清洗和倉儲等費用。
（7）大袋蘑菇栽培種由于生產周期短，節約了大量電能；由于操作簡便，易于機械化生產，節省了勞動力；成品率的提高等等因素使得每袋成本控制在15～17元左右（而生產同樣重量的傳統瓶裝栽培種成本要超過25元），而且運輸成本降低一半，采用該技術后可使中國蘑菇栽培種參與國際競爭（售價只有國際的1/4）
（8）該發明采用的高壓滅菌鍋，在普通的臥式高壓滅菌鍋的鍋體上設置抽真空系統和空氣凈化系統，實現了在小麥培養基高壓滅菌處理后，在無菌的環境下進行快速冷卻，而且將滅菌與冷卻步驟整體化，操作方便快捷，節約時間，有效的保證了菌種的質量。[3]
采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種附圖說明
圖1是母種的活化培養步驟流程圖，其中10表示從液氮保藏罐取出的安瓿管，裝有保存菌株；11表示液氮保藏罐；12表示裝有PDA培養基的培養皿；S1表示母種在PDA培養基中的活化培養；14表示在培養皿中繼續進行母種的活化培養狀態；16表示母種在培養皿中培養完畢；18表示活化培養的母種切片。
圖2是原種的預培養步驟流程圖，其中18表示活化培養的母種切片，20為裝有原種培養基的容器，21為高壓滅菌鍋，S2是對裝入容器20的原種培養基進行滅菌的步驟，S3是對原種培養基進行滅菌后，使其冷卻至常溫的步驟，S4是在原種培養基中接種預先制得的母種的步驟，步驟S5是使接種了母種的原種培養基進行預培養的步驟。
圖3表示正式培養步驟流程圖，其中30為裝有小麥培養基的呼吸塑料袋，32為呼吸塑料袋上的呼吸膜，22為裝有預培養完成的原種的容器，步驟S6是對裝入呼吸塑料袋30的小麥培養基進行裝入殺菌車滅菌的步驟，步驟S7是使滅菌后的呼吸塑料袋30冷卻至室溫的步驟，步驟S8為冷卻后，將預培養步驟制得的原種接種到呼吸塑料袋30的小麥培養基中的步驟，步驟S9為接種原種的小麥培養基進行正式培養的步驟，S10為正式培養結束的大袋栽培種裝箱后移入冷庫保藏步驟，S11為制作結束。
圖4為旋轉蒸煮鍋構造示意圖，其中，34為旋轉蒸煮鍋鍋體，36為進料口，38為溫度計，40為壓力表，42為進汽閥門，44為出汽噴頭，46為出料口。
圖5為《采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種》的高壓滅菌鍋構造示意圖，其中，48為高壓滅菌鍋體，49為產蒸汽鍋爐，50為空氣過濾器，51為空壓機處閥門，52為空壓機，54為蒸汽進氣閥門，56為空氣過濾器處閥門，60為排氣孔處閥門，62為排氣孔，64為鍋體的壓力表，66為鍋體上的溫度計，68為真空泵，69為安全閥，70為真空泵處閥門，72為裝入呼吸袋的殺菌車。
圖6是該發明的制作過程流程圖。[3]
圖1 | 圖2 | 圖3 | 圖4 | 圖5 | 圖6 |
采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種技術領域
《采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種》屬于微生物技術及其設備領域，更具體涉及一種采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種。[3]
采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種權利要求
1.一種采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于：采用呼吸塑料袋作為正式培養的容器，經過母種的活化培養步驟、制備原種的預培養步驟以及將原種接種于大袋栽培種的正式培養步驟制作出大袋蘑菇栽培種。
2.根據權利要求1所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于：所述制作步驟為：
（1）母種的活化培養步驟：由保存菌株進行活化培養獲得母種；
（2）原種的預培養步驟：將母種進行預培養獲得原種；
（3）正式培養步驟：將呼吸塑料袋裝入高壓滅菌鍋中，對袋內小麥培養基進行高壓滅菌，高壓滅菌后，待塑料袋和小麥培養基冷卻至常溫，然后將步驟（2）預培養獲得的原種接種于所述呼吸塑料袋中小麥培養基進行正式培養，培養過程培養室溫度保持20～25℃，培養13～16天待呼吸塑料袋長滿菌絲，正式培養完畢，將裝有菌種的呼吸塑料袋移入3±1℃冷庫保藏，大袋蘑菇栽培種制作完成。
3.根據權利要求2所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于：所述母種的活化培養步驟為：菌株保存于液氮保藏罐中的安瓿管中，將安瓿管中的菌株接種于PDA培養基上進行培養，PDA培養基為常用的真菌培養基：200克馬鈴薯切片加入1000毫升水煮沸20分鐘，過濾后加入20克葡萄糖和15～18克瓊脂加熱溶解，再次過濾最終體積為1000毫升，后經121℃/0.1兆帕進行20分鐘高壓滅菌而成；培養溫度為22～24℃；當菌絲長滿PDA培養基時，培養完畢，將活化培養完的母種切成12～15毫米的小塊切片，備制備原種的預培養步驟使用。
4.根據權利要求2所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于：所述原種的預培養步驟中：采用的原種培養基為，均按照質量份數；21份的新鮮棉籽殼、8份牛糞、0.03份石膏、0.07份石灰加70份水發酵14～16天后，曬干后，34～36份發酵棉籽殼加入1～2份蛭石、1～2份*、1份CACO3和1份石灰加60份水混合均勻即成為原種培養基；將裝有原種培養基的容器在高壓滅菌鍋內進行高壓滅菌，在126℃/0.15兆帕進行80～120分鐘的滅菌處理，滅菌后，使其冷卻至常溫，將母種的活化培養后的切片投入預培養容器進行接種；預培養溫度為22～24℃，預培養18～22天。
5.根據權利要求4所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于：所述預培養容器采用1000毫升的帶過濾呼吸蓋的塑料廣口瓶，并按照1000毫升的原種培養容器中裝入900毫升的原種培養基，每個預培養容器中接種1～3個母種切片。
6.根據權利要求2所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于：所述正式培養步驟培養過程為：
a）小麥培養基的調質：所述小麥培養基調質的整個過程在旋轉蒸煮鍋中進行，往旋轉蒸煮鍋加入占旋轉蒸煮鍋容積40％的小麥培養基：按重量份，其中小麥82～91份，*5～10份，輕質碳酸鈣2～4份和石膏2～4份；關閉進料口，讓旋轉蒸煮鍋旋轉五分鐘，讓各種材料混合均勻后，再通過進料口注入占旋轉蒸煮鍋容積20％的水；最后再關閉進料口，打開進汽閥門，通入高壓蒸汽，對旋轉蒸煮鍋內小麥培養基進行蒸煮，蒸煮溫度110℃，壓力0.08兆帕，維持15～20分鐘，蒸煮結束的小麥培養基倒出進行攤晾冷卻，冷卻至室溫；
b）小麥培養基的裝袋、滅菌：將小麥培養基裝入呼吸塑料袋，所述呼吸塑料袋長寬厚規格為：630毫米×360毫米×80微米，帶有2個35毫米×35毫米呼吸膜，裝入6千克的小麥培養基或495×320毫米×60微米，帶有1個35毫米×35毫米呼吸膜，裝入3千克的小麥培養基；并采用高壓滅菌鍋在126℃/0.15兆帕下進行滅菌處理，高壓滅菌時間為120～150分鐘；并在高壓滅菌鍋中冷卻至室溫；
c）小麥培養基接種：在潔凈度為10000級的緩沖間、潔凈度為1000級的接種室里，放入潔凈度為100級超凈工作臺進行接種操作；接種量為每個呼吸塑料袋，6千克接入180～230毫升的原種或者每個呼吸塑料袋，3千克接入90～120毫升的原種，接種后，用封口機將呼吸塑料袋封口，并進行翻袋混合，翻袋次數10～15次；在培養溫度為20～25℃下培養13～16天，待呼吸塑料袋長滿菌絲，正式培養完畢移入3±1℃冷庫保藏，大袋蘑菇栽培種制作完成。
7.一種如權利要求2、3、4、5或6所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種中用到的高壓滅菌鍋，包括整個常規的臥式高壓滅菌鍋，其特征在于：所述臥式高壓滅菌鍋的鍋體上還設置有抽真空系統和空氣凈化系統。
8.根據權利要求7所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種中用到的高壓滅菌鍋，其特征在于：所述鍋體上設置的抽真空系統包括真空泵，所述真空泵通過閥門由三通管道一端連接鍋體，該三通管道的另一端設置一閥門作為排氣孔；所述空氣凈化系統包括空壓機，所述空壓機通過一閥門由管道連接一空氣過濾器；所述空氣過濾器通過一閥門由管道連接鍋體，該閥門與鍋體間的管道上設置有一安全閥。
9.一種如權利要求8所述的高壓滅菌鍋在采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種中的使用方法，其特征在于：將小麥培養基在所述高壓滅菌鍋中按照常規高壓滅菌操作進行滅菌處理，滅菌結束后，關閉蒸汽進氣閥門，停止通入蒸汽，立即啟動真空泵，同時打開真空泵處閥門，通過真空泵直接排出濕熱空氣，當鍋體的壓力表降到0.05兆帕，立即關閉真空泵和真空泵處閥門，同時啟動空壓機，打開空壓機處閥門和空氣過濾器處閥門，通過空氣過濾器向高壓鍋鍋體吹入潔凈空氣，防止雜菌進入鍋體，進而進入呼吸塑料袋中，再緩緩打開排氣孔處閥門，通過排氣孔直接排出濕熱空氣，保持鍋體的壓力表為正壓；冷卻至室溫，通過鍋體上的溫度計觀察溫度。[3]
采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種實施方式
采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種制作步驟
所述制作步驟為：
（1）母種的活化培養步驟：菌株保存于液氮保藏罐中的安瓿管中，將安瓿管中的菌株接種于PDA培養基上進行培養；PDA培養基為常用的真菌培養基（200克馬鈴薯切片加入1000毫升水煮沸20分鐘，過濾后加入20克葡萄糖和15～18克瓊脂加熱溶解，再次過濾最終體積為1000毫升，后經121℃/0.1兆帕進行20分鐘高壓滅菌而成）；培養溫度為22～24℃；當菌絲長滿培養基時，培養完畢，將活化培養完的母種切成12～15毫米的小塊切片，備制備原種的預培養步驟使用。
（2）制備原種的預培養步驟：所述制備原種的預培養步驟中：采用的原種培養基為，均按照質量份數：21份的新鮮棉籽殼、8份牛糞、0.03份石膏、0.07份石灰加70份水發酵14～16天后，曬干后，34～36份發酵棉籽殼加入1～2份蛭石、1～2份*、1份CACO3和1份石灰加60份水混合均勻即成為原種培養基；將裝有原種培養基的容器在高壓滅菌鍋內進行高壓滅菌，在126℃/0.15兆帕進行80～120分鐘的滅菌處理，滅菌后，使其冷卻至常溫，將母種切片投入預培養容器進行接種；預培養溫度為22～24℃，預培養18～22天；所述預培養容器采用1000毫升的帶過濾呼吸蓋的塑料廣口瓶，并按照1000毫升的預培養容器中裝入900毫升的原種培養基，每個預培養容器中接種1～3個切片。
（3）正式培養步驟培養：
a）所述小麥培養基調質的整個過程在旋轉蒸煮鍋中進行，往旋轉蒸煮鍋加入占旋轉蒸煮鍋容積40％的小麥培養基，其中按照質量份小麥82～91份，*5～10份，輕質碳酸鈣2～4份和石膏2～4份；關閉進料口，讓旋轉蒸煮鍋旋轉五分鐘，讓各種材料混合均勻后，再通過進料口注入占旋轉蒸煮鍋容積20％的水；最后再關閉進料口，打開進汽閥門，通入高壓蒸汽，對旋轉蒸煮鍋內小麥培養基進行蒸煮，蒸煮溫度110℃，壓力0.08兆帕，維持15～20分鐘，蒸煮結束的小麥培養基倒出進行攤晾冷卻，冷卻至室溫；
b）小麥培養基的裝袋、滅菌：將小麥培養基裝入呼吸塑料袋，所述呼吸塑料袋長寬厚規格為：630毫米×360毫米×80微米，帶有2個35毫米×35毫米呼吸膜，裝入6千克的小麥培養基或495×320毫米×60微米，帶有1個35毫米×35毫米呼吸膜，裝入3千克的小麥培養基；并將呼吸塑料袋裝入殺菌車采用高壓滅菌鍋在126℃/0.15兆帕下進行滅菌處理，高壓滅菌時將為120～150分鐘；并在高壓滅菌鍋中冷卻至室溫；
c）小麥培養基接種：在潔凈度為10000級的緩沖間、潔凈度為1000級的接種室里，放入潔凈度為100級超凈工作臺進行接種操作；接種量為每個呼吸塑料袋（6千克）接入180～230毫升的原種或者每個呼吸塑料袋（3千克）接入90～120毫升的原種，接種后，用封口機將呼吸塑料袋封口，并進行翻袋混合，翻袋次數10～15次；在培養溫度為20～23℃下培養13～16天后，待呼吸塑料袋長滿菌絲正式培養完畢，將裝有菌種的呼吸塑料袋移入3±1℃冷庫保藏，大袋蘑菇栽培種制作完成。
以上小麥培養基的滅菌采用的高壓滅菌鍋，是在常規的臥式高壓滅菌鍋上進行改進，即在臥式高壓滅菌鍋的鍋體設置抽真空系統和空氣凈化系統：所述鍋體上設置的抽真空系統包括真空泵，所述真空泵通過閥門由三通管道一端連接鍋體，該三通管道的另一端設置一閥門作為排氣孔；所述空氣凈化系統包括空壓機，所述空壓機通過一閥門由管道連接一空氣過濾器；所述空氣過濾器通過一閥門由管道連接鍋體，該閥門與鍋體間的管道上設置有一安全閥。
結合附圖5說明高壓滅菌鍋的使用方法為：將小麥培養基在所述高壓滅菌鍋體48中按照常規高壓滅菌操作進行滅菌處理，滅菌結束后，關閉蒸汽進氣閥門54，停止通入蒸汽，立即啟動真空泵68，同時打開真空泵處閥門70，通過真空泵68直接排出濕熱空氣，當鍋體的壓力表64上的示數降到0.05兆帕，立即關閉真空泵68和真空泵處閥門70，同時啟動空壓機52，打開空壓機處閥門51和空氣過濾器處閥門56，通過空氣過濾器50向高壓鍋鍋體48內吹入潔凈空氣，防止雜菌進入鍋體，進而進入呼吸塑料袋中，再緩緩打開排氣孔處閥門60，通過排氣孔62直接排出濕熱空氣，保持鍋體48的壓力表64為正壓；冷卻至室溫，通過鍋體48上的溫度計66觀察溫度。
優異效果對比數據
表1中，對傳統使用的瓶裝栽培種和用上述方法制作的大袋蘑菇栽培種進行比較
表1
*注：每個呼吸塑料袋可裝麥粒菌種6千克或3千克，相當于750毫升玻璃瓶麥粒菌種15瓶或8瓶
表1中以容量為6千克呼吸塑料袋為例，對瓶裝生產蘑菇栽培種和使用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種，具備較大差異的部分進行了總結。[3]
采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種實施案例
- 實施例
在蘑菇的大袋栽培種制作中，分為三步進行，首先是由保存菌株進行活化培養獲得母種，稱為活化培養步驟S1，其次將母種進行擴繁培養獲得原種，稱之為預培養步驟S5，最后將預培養獲得的原種接入裝有小麥培養基（濕重6千克）的呼吸塑料袋30中，在所述小麥培養基中進行培養栽培種，稱為正式培養步驟S9，上述呼吸塑料袋30裝入小麥培養基后，均要在高壓滅菌鍋中作高壓滅菌，然后使小麥培養基和呼吸塑料袋30冷卻至室溫，再把預培養后獲得原種接入至上述塑料參考附圖對該實施例進行詳細說明。
《采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種》的蘑菇大袋栽培種制作方法的特征是，包括母種的活化培養步驟，制備原種的預培養步驟，以及將原種接入大袋栽培種的正式培養步驟。以下，依次對母種的活化培養步驟、制備原種的預培養步驟和接種大袋栽培種的正式培養步驟進行說明。
圖1-3是用于蘑菇菌種的母種活化培養步驟、原種的預培養步驟和大袋栽培種的正式培養步驟的說明圖。
圖1表示母種的活化培養步驟。該圖中，10表示從液氮保藏罐取出的安瓿管，裝有保存菌株。首先將安瓿10中的菌株接種于PDA培養基12。PDA培養基12的為常用的真菌培養基（200克馬鈴薯切片加入1000毫升水煮沸20分鐘，過濾后加入20克葡萄糖和15～18克瓊脂加熱溶解，再次過濾最終體積為1000毫升，后經121℃/0.1兆帕進行20分鐘高壓滅菌而成）。步驟S1為PDA培養基12中的母種的活化培養步驟。該實施狀態中制作的是雙孢蘑菇菌種。步驟S1的活化培養步驟中的培養溫度為22～24℃。
14表示在PDA培養基12種繼續進行母種的活化培養狀態。繼續進行培養后，蘑菇菌絲長滿PDA培養基。16表示在PDA培養基12上培養完畢。切片18表示活化培養的母種切片狀態。預培養時使用切成12～15毫米的小塊的多個切片18。
圖2表示原種的預培養步驟。預培養是指在較大的容器內制備原種的預培養步驟。
20為培養原種的容器。該實施狀態中，裝有原種培養基的容器20是1000毫升的帶過濾呼吸蓋的塑料廣口瓶。采用的原種培養基為，均按照質量份數：21份的新鮮棉籽殼、8份牛糞、0.03份石膏、0.07份石灰加70份水發酵14～16天后，曬干后，34～36份發酵棉籽殼加入1～2份蛭石、1～2份*、1份CACO3和1份石灰加60份水混合均勻即成為原種培養基。
步驟S2是對裝入容器20的原種培養基進行滅菌的步驟。該實施狀態中，高壓滅菌鍋用作高壓滅菌，在126℃/0.15兆帕進行80～120分鐘的滅菌處理。
步驟S3是對原種培養基進行滅菌后，使其冷卻至常溫的步驟。
步驟S4是在原種培養基中接種預先用PDA培養基12制得的母種的步驟。將前述培養后的PDA培養基12的1～3個母種切片18投入容器20種進行接種。
步驟S5是使接種了母種的原種培養基進行培養的步驟。該實施狀態中培養溫度為22～24℃，培養18～22天，該步驟稱為預培養步驟。
通過預培養完成原種的預培養后，進入正式培養。
圖3表示正式培養步驟。正式培養中，使用裝有小麥培養基的呼吸塑料袋30，將預培養中獲得的原種接種于小麥培養基進行培養。呼吸塑料袋30在該實施狀態采用600毫米×300毫米×80微米（長:寬:厚），可裝入6千克的小麥培養基，帶有2個35毫米×35毫米呼吸膜32或495×320毫米×60微米（長:寬:厚），可裝入3千克的小麥培養基，帶有1個35毫米×35毫米呼吸膜32。
正式培養過程中，首先，要對裝入呼吸塑料袋30的小麥培養基進行調制，圖4表示旋轉蒸煮鍋構造，這個過程要在旋轉蒸煮鍋34內完成，通過進料口36往旋轉蒸煮鍋34加入旋轉蒸煮鍋34容積40％的小麥培養基（其中按照質量份小麥82～91份，*5～10份，輕質碳酸鈣2～4份和石膏2～4份）。然后關閉進料口36，讓旋轉蒸煮鍋34旋轉五分鐘，讓各種材料混合均勻后，再通過進料口36注入水（旋轉蒸煮鍋34體積的20％）。最后再關閉進料口36，打開進汽閥門42，通入高壓蒸汽，由出汽噴頭44對旋轉蒸煮鍋34內小麥培養基進行蒸煮，通過觀察溫度計38和壓力表40，來對進汽閥42進行高壓蒸汽調節，該實施狀態中蒸煮溫度110℃，壓力0.08兆帕，維持15～20分鐘，整個蒸煮過程的時間大概在40分鐘，蒸煮結束后小麥由出料口46倒出進行攤晾冷卻，冷卻時室溫后裝入呼吸塑料袋30。
步驟S6是對裝入呼吸塑料袋30的小麥培養基進行滅菌的步驟。該滅菌步驟采用的是高壓滅菌。該實施狀態中，使用如具體實施方式中描述的改進的高壓滅菌鍋，在高壓滅菌鍋中推入裝著呼吸塑料袋30的殺菌車72，對呼吸塑料袋30進行高壓滅菌。該實施狀態中，在126℃/0.15兆帕進行120～150分鐘的滅菌處理。
步驟S7是使滅菌后的呼吸塑料袋30冷卻至室溫的步驟。該冷卻步驟中，如圖5所示，在滅菌結束后，將小麥培養基在所述高壓滅菌鍋體48中按照常規高壓滅菌操作進行滅菌處理，滅菌結束后，關閉蒸汽進氣閥門54，停止通入蒸汽，立即啟動真空泵68，同時打開真空泵處閥門70，通過真空泵68直接排出濕熱空氣，當鍋體的壓力表64上的示數降到0.05兆帕，立即關閉真空泵68和真空泵處閥門70，同時啟動空壓機52，打開空壓機處閥門51和空氣過濾器處閥門56，通過空氣過濾器50向高壓鍋鍋體48內吹入潔凈空氣，防止雜菌進入鍋體，進而進入呼吸塑料袋中，再緩緩打開排氣孔處閥門60，通過排氣孔62直接排出濕熱空氣，保持鍋體48的壓力表64為正壓；冷卻至室溫，通過鍋體48上的溫度計66觀察溫度，進入隨后的栽培種接種階段。
步驟S8為冷卻后，將預培養步驟制得的原種接種到呼吸塑料袋30的小麥培養基中的步驟。接種栽培種時，為了不混入雜菌，必須十分小心。該實施狀態中，在潔凈度為10000級的緩沖間、潔凈度為1000級的接種室里，放入潔凈度為100級超凈工作臺進行接種操作。該實施狀態中，接種量為每個呼吸塑料袋（6千克）接入180～230毫升的原種或者每個呼吸塑料袋（3千克）接入90～120毫升的原種，接種后，呼吸塑料袋30馬上用封口機進行熱熔封口，并將原種和小麥培養基在呼吸塑料袋30里進行翻袋混合，該實施狀態中，翻袋次數10～15次。
步驟S9為接種原種的小麥培養基進行培養的步驟。46為裝著接種過原種的培養基的呼吸塑料袋，且原種和小麥培養基混合。該實施狀態中培養溫度為20～25℃，培養13～16天，待呼吸塑料袋長滿菌絲正式培養結束，該步驟稱為正式培養步驟。
步驟S10為正式培養后的大袋栽培種裝箱后移入冷庫保藏，大袋蘑菇栽培種制作完成。[3]
采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種榮譽表彰
2016年12月7日，《采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種》獲得第十八屆中國優秀獎。[2]
參考資料
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