伊人久久国产精品,色综合久久久久,精品国产香蕉伊思人在线又爽又黄,国产激情对白一区二区三区四

液相系統(tǒng)組件

  HPLC核心組件為進行混合物分離的色譜柱。流動相經(jīng)由高壓泵到達進樣器，再流入色譜柱，最后進入質(zhì)譜儀。

  讓我們先從高壓泵開始：該泵通過過濾器從流動相瓶中吸取溶劑，對溶液進行加壓，使得溶劑能夠克服柱填料以及管路的阻力，并將溶劑泵入進校器。雖然目前大部分儀器都含有脫氣模塊，但仍推薦采用超聲法對流動相溶劑進行脫氣，防止管路中出現(xiàn)氣泡。HPLC系統(tǒng)常采用往復(fù)式活塞泵：它由鉆出的金屬體組成，以提供泵送腔，泵送腔在背面用特氟龍密封，通過特氟龍密封件驅(qū)動惰性活塞。帶有止回閥的入口和出口端口允許溶劑進入和退出泵腔。入口止回閥關(guān)閉以防止在活塞行程的增壓部分溶劑跑回溶劑庫。同時，出口止回閥打開，允許溶劑輸送到通往注射器的管路。當(dāng)凸輪驅(qū)動馬達將活塞拉回時，進油單向閥打開以容納更多的溶劑，而出油單向閥關(guān)閉以防止加壓溶劑從噴油器管路中流回。泵運行的關(guān)鍵是活塞和活塞密封。的泵活塞由綠寶石玻璃制成，通常被稱為藍寶石活塞。順便說一句，藍寶石活塞不是藍色的，但它的名字有助于證明必須更換破損活塞的成本。活塞沿其驅(qū)動軸線方向具有很大的強度，但很容易在軸線上折斷。大多數(shù)泵的設(shè)計是為了避免活塞抖動，所以見的破壞活塞的原因是密封上的緩沖器積聚和泵頭拆卸時的破壞，以檢查活塞的狀況。

  密封是對泵運行至關(guān)重要環(huán)節(jié)。它是由一個聚四氟乙烯的圓環(huán)，內(nèi)含一個中心有孔的嵌入式圓鋼彈簧，泵活塞通過這個圓環(huán)。這種油炸圈形狀的密封件適合在泵頭后部的圓形凹陷中，不像密封件的厚度那么深。當(dāng)泵頭用螺釘固定在泵端面時，密封被壓縮，彈簧擠壓到泵活塞上。它在活塞的行程中前進和后退時，在活塞周圍形成一個高壓液體屏障。當(dāng)活塞通過特氟龍密封時，泵腔中的液體潤滑活塞，當(dāng)活塞上的薄膜到達密封外側(cè)時，液體蒸發(fā)。流動相中的緩沖劑或離子對試劑在活塞上結(jié)晶，在回程上被密封件擦去。如果它們不擦掉或沒有被洗掉，它們就會堆積并將活塞變成一把鋸子，鋸子穿過特氟龍，產(chǎn)生泄漏，需要定期更換密封。密封更換是見的操作，如果不正確的話，會導(dǎo)致活塞斷裂。

 驅(qū)動凸輪和壓力傳感器是影響泵運行的另外兩個部件。這種類型泵的基本問題是脈沖。泵的一部分時間是向柱體加壓和驅(qū)動溶劑，活塞的一部分時間是重新填充溶劑室。泵腔內(nèi)壓力上升和下降，導(dǎo)致通過出口單向閥輸送的溶劑脈沖。通過使用反向多泵頭、電子泵電機控制、脈沖阻尼三種方法克服了這一問題。如果有兩個泵頭在不同的時間通過T型管向同一溶劑管線供料，脈動減小。其中一個可以重新填充，而另一個則驅(qū)逐出溶劑。顯然，這種方法通過添加組件和工程增加了泵的成本，但確實產(chǎn)生了的溶劑輸送。通過對泵電機進行電子控制，使其在補料和再增壓行程中加速運動，可以設(shè)計出在輸送模式下花費大部分時間的單柱塞泵。這種泵浦仍然是脈沖的，但是脈沖性大大降低。它的性能不如一個好的雙頭泵，但它的建造成本明顯較低。

  脈沖阻尼器是減少液體脈沖的最后組件。沒有廠家愿意承認其泵需要脈沖阻尼器，但所有廠家都使用。在泵的出口閥和進樣器之間有兩條線進出金屬的裝置可以是壓力傳感器、壓力傳感器或脈沖緩沖器。在高壓泵上切開脈沖緩沖器，你會發(fā)現(xiàn)它包含一個非常細的內(nèi)徑不銹鋼油管的長的、壓縮的線圈。當(dāng)脈沖發(fā)生時，這個螺旋管拉伸然后再次壓縮，通過彈簧效應(yīng)阻尼脈沖。壓力變送器也有油管進出和信號線出來。內(nèi)部是帶有傳感器的彎曲的油管線圈。隨著壓力的增加，管路發(fā)生拉伸，這種偏轉(zhuǎn)可以通過傳感器測量，并將信號發(fā)送到泵前的壓力表。在進行需要惰性條件的分離時，重要的是要理解這些裝置是存在的。兩者都含有不銹鋼，可以被高濃度的鹽腐蝕，并且可以污染金屬敏感的酶純化物。

  HPLC系統(tǒng)中的第二個硬件部件是進樣器。活塞式進樣器是的進樣器類型。在閥門的一個位置，來自泵的高壓液體流經(jīng)內(nèi)部旁路流出至HPLC柱。閥門的另一側(cè)連接小口徑回路、注入口和廢液排出器。

  溶解在流動相中的樣品從注射器注入到定量環(huán)中，使定量環(huán)過量至少20 %。也可以使用部分進樣，只要緩慢進樣并保持不超過循環(huán)體積的75 %，以避免從進樣口丟失樣品。接著，將注射器手柄快速轉(zhuǎn)動到注射位置。樣品從環(huán)路后端洗出，給予次進樣/先出樣以維持樣品濃度。自動進樣器通常采用這種類型的回路和閥門布置，盡管它們可能將樣品拉入回路而不是推入。他們還使用多種清洗方案，以避免從瓶子移動到瓶子進行后續(xù)注射時的樣品攜帶污染。

  HPLC系統(tǒng)中的第三個硬件部分是檢測器。在LC / MS系統(tǒng)中，這將是質(zhì)譜儀的檢測器之一，但其他HPLC檢測器可能被用于從色譜柱的同一溶劑流中，或者與質(zhì)譜儀串聯(lián)，或者使用分流器將部分或大部分流出液分流到二級檢測器，如折射率( RI )檢測器、電導(dǎo)率檢測器、紫外( UV )檢測器或熒光檢測器( FL )。所有這些二級峰檢測器必須使用非常低的死體積流通池，以防止分離的色譜峰重新混合或用流動相稀釋。每一個都提供了峰成分的額外信息。折射率和電導(dǎo)率檢測器主要是質(zhì)量檢測器，其峰面積(或高度)與每個峰中物質(zhì)的量成正比。熒光計對吸收紫外光的特定材料發(fā)生反應(yīng)，并在較高波長處重新發(fā)射。紫外檢測器是的HPLC檢測器。可變探測器可以設(shè)置為只在特定波長下吸收的化合物，而二極管陣列紫外探測器可以在陣列可用的波長范圍內(nèi)檢測吸收紫外光的化合物。

LC / MS系統(tǒng)的個硬件部分是一臺計算機，用于數(shù)據(jù)采集和處理。同進用于控制所有系統(tǒng)模塊和獲取峰數(shù)據(jù)，量化峰面積，確定每個峰的組分分子量，識別雜質(zhì)，并將峰的裂解規(guī)律與已知數(shù)據(jù)庫進行比較，以確定目標(biāo)化合物。

梯度洗脫與等度洗脫系統(tǒng)

到目前為止，我們只描述了一個非常簡單的液相系統(tǒng) ，一個便宜的單泵等度洗脫系統(tǒng)，能夠泵出一個不變的流動相。改變儲庫中的溶劑可以產(chǎn)生溶劑的階梯梯度，用于洗脫或洗脫后期運行的峰。對于許多專用的應(yīng)用程序，這可能是所需要的全部。復(fù)雜的溶劑分離和方法開發(fā)需要一個更復(fù)雜的系統(tǒng)。相比于等度洗脫，梯度洗脫系統(tǒng)能夠?qū)崿F(xiàn)更復(fù)雜混合物的分離。梯度系統(tǒng)對色譜柱上的物質(zhì)產(chǎn)生可重復(fù)的、連續(xù)變化的流動相組成。種方法是添加第二個溶劑泵和貯液器、混合器和泵流量控制器，使一個泵的速度增加而另一個泵的速度減慢，產(chǎn)生雙泵梯度系統(tǒng)。溶劑的混合是在泵出口的高壓側(cè)進行的，因此任何可能由混合熱釋放的溶解氣體都被迫返回到溶液中，直到它們退出檢測器流通池。第二種共梯度系統(tǒng)僅使用單個泵，但增加了多個貯液器、連接它們的可編程開關(guān)閥、混合器以及控制泵流量和開關(guān)閥的控制器。該系統(tǒng)的優(yōu)點是它的成本較低，因為只需要一個泵，并且有兩個以上的流動相可用于生產(chǎn)梯度，用于方法開發(fā)和自動柱洗脫。

  在其他因素相同的情況下，由于開關(guān)閥梯度系統(tǒng)在價格和性能上的優(yōu)勢，在任何情況下都是理想的選擇。然而，該系統(tǒng)產(chǎn)生的梯度不如雙泵梯度系統(tǒng)產(chǎn)生的梯度精確或可重復(fù)。開關(guān)閥梯度系統(tǒng)還需要用氦氣對儲液器溶劑進行脫氣。切換閥-混合器組合中溶劑混合不脫氣產(chǎn)生的熱量會導(dǎo)致泵頭中空氣被抽出溶液，造成空化，氣塞堵塞溶劑輸送至色譜柱。當(dāng)泵活塞通過進氣閥拉入溶劑時，空氣中的氧氮混合氣在溶劑中形成大氣泡粘附在泵表面。氦在活塞行程的壓縮部分形成小的、不粘的氣泡，被迫返回到溶液中。

  大多數(shù)開關(guān)閥系統(tǒng)提供了3個和4個溶劑庫，但3個和4個溶劑梯度的方法開發(fā)非常復(fù)雜，以至于很少看到超過一個雙溶劑法的梯度，并且可能從第三個溶劑庫中添加另一個溶劑。第三種和第四種溶劑的主要用途是用于自動化的色譜柱清洗和方法篩選，這兩種溶劑在用于LC / MS分析之前可能會被淘汰。從第三個儲庫中加入恒定水平的揮發(fā)性緩沖液可能是在LC / MS操作中保留的一種用途。

  涉及極性和揮發(fā)性范圍寬的溶劑的梯度方法向質(zhì)譜儀接口提出了問題。接口的目的是雙重的。在不損失分析物的情況下，必須盡可能地除去溶劑，并使其組分揮發(fā)和電離，以傳輸至質(zhì)譜儀。在分離過程中，如果流動相中含有過寬的極性變化，溶劑可能不能被除去，并且會抑制界面的電離和質(zhì)譜中的離子檢測。出于同樣的原因，涉及非揮發(fā)性緩沖液或離子對試劑的梯度在用于LC / MS之前必須作出一些調(diào)整。