液相色譜柱的結構：
（1）液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環）、篩板（濾片）、接頭、螺絲（封頭）與柱填料等組成。
柱管：多用不銹鋼制成，若果使用時柱壓不高于70kg/cm2時，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填。空柱各組件均為不銹鋼材質，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕。壓帽：即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽，中部有小孔，多為聚四氟乙烯制成，用于固定篩板。
密封環：位于接頭螺旋環內壁的彈性環，多為聚四氟乙烯制成，用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。
（2）柱填料：
液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進行的，柱子的分類是依據填料類型而定。
正相柱：
多以硅膠為柱填料。根據外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在3-10 μm的范圍內。另一類正相填料是硅膠表面鍵合-CN，-NH2等官能團即所謂的鍵合相硅膠。
反相柱：
主要是以硅膠為基質，在其表面鍵合十八烷基官能團(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。
常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在3-10μm之間。
色譜柱的安裝：
（1）拆開柱包裝盒，確認色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內貯存的溶劑。
（2）擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
（3）按柱管上標示的流動相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與進樣閥出口相連接(如，條件允許，建議在柱前使用保護柱)；柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57 mm、內徑為0.1～0.3 mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環。在接管時一定要設法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環后盡量用力插到底，然后順時針擰緊空心螺釘，直到擰不動為止。
色譜柱的維護:
1、良好的儲存條件：在未使用時，應將液相色譜柱儲存在干燥、陰涼、避光和無塵的環境中。如需長期存儲，應使用適當的保護劑或溶劑保存。
2、洗脫緩慢：在液相色譜分析過程中，需要注意洗脫緩慢，以避免對柱產生沖擊。不要突然改變洗脫速度，這可能會導致柱內堵塞或損壞。
3、定期清洗：定期清洗柱子，可以去除殘留溶劑和雜質，延長柱壽命。一般建議每隔100-200個樣品進行一次清洗，清洗液通常為純水、乙醇或甲醇等。
4、避免高溫：避免將液相色譜柱暴露在高溫環境中，因為高溫會影響柱子的穩定性和分離效果。在分析結束后，應立即將柱子移出儀器并存放在適當的環境中。
5、轉換流體：在使用不同相時，應謹慎轉換流體。必要時，在更換相的過程中，可以使用簡單的“溫和”方法，例如交替使用乙醇和水進行流動，以使柱內緩慢地恢復平衡。
液相色譜柱的使用:
色譜柱在使用前，進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是條件)，只有這樣，測得的結果才有可比性。
1.樣品的前處理：
（1）使用流動相溶解樣品；
（2）使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質；
（3）使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質；
2.流動相的配制：
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的，因此，要求流動相具備以下的特點：
（1）流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
（2）流動相具有一定惰性，與樣品不產生化學反應(特殊情況除外)。
（3）流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時，降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
（4）流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應，如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
（5）流動相沸點不要太低，否則容易產生氣泡，導致實驗無法進行。
（6）在流動相配制好后，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發生作用。
3. 流速的選擇：
因柱效是柱中流動相線性流速的函數，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求柱效，使用流速。對內徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1mL/min，對于內徑為4.0mm柱，流速0.8mL/min為佳。當選用流速時，分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如，使用反相柱時，可適當增加甲醇或乙腈的含量)。
4. 流動相使用注意事項：
（1）由于甲醇廉價，對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)。
（2）對于正相柱推薦使用沸程為30-60 ℃的石油醚或提純后的己烷作流動相，沒有提純的己烷不得使用。用水使用超純水(電阻率大于18兆歐)，去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質，有可能影響分析結果。
（3）含水流動相在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。加入，防止細菌生長。
（4）流動相要求使用0.45μm濾膜過濾，除去微粒雜質。
（5）使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。
常見的問題及解決方法:
1.使用一段時間后柱壓過高：
解決方法：首先查看是否HPLC系統原因，排除系統原因后，原因基本是由于實驗過程中雜質在柱中的累積。盡量完善操作條件，做完樣品后要及時沖洗干凈，如緩沖鹽的流動相一定要用高比例的水溶液(如，90％)沖洗后再用有機相保存。
2.篩板堵塞與柱頭塌陷：
解決方法：如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，小心取下篩板，用5%左右的硝酸溶液超聲處理20分鐘左右，再用純水超聲20分鐘左右，重新裝入色譜柱。
3.色譜柱頭的填料被樣品污染：
解決方法：如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細修復后，重新安裝上柱頭螺絲。
4.色譜柱內緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑，形成結晶析出：
解決方法：如確定是鹽結晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
